試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人受體抗體(AIRA)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗胰島素受體抗體(AIRA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
人受體ELISA試劑盒的操作步驟:
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4、除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。